RESUMO Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.

ABSTRACT This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.

RESUMO O presente estudo teve como objetivo detectar os principais genes de virulência e resistência antimicrobiana em Staphylococcus aureus oriundos de leite bovino mastítico e classificá-los de acordo com a tipagem do gene agr. Foram selecionados 55 isolados de seis unidades produtores no estado do Rio de Janeiro. Destas, o gene fbnA foi encontrado em 27,3% das cepas e 78,2% possuíam o gene fbnB. Em nenhuma cepa foi encontrado o gene cap5 e 3,6% possuíam o gene cap8. O gene hlA foi encontrado em 94,5% das cepas e 89,1% possuíam o gene hlB. O gene icaA foi encontrado em 67,3% das cepas e 87,3% possuíam o gene icaD. Com base nesses resultados, foi possível estabelecer 12 diferentes perfis de virulência. Prevalência do agr tipo II foi detectada em 81,8% dos isolados. Considerando-se a avaliação da resistência antimicrobiana, as cepas estudadas foram suscetíveis a todos os antibióticos exceto penicilina, sendo detectado um percentual de 83,6% de cepas resistentes. Nenhuma das cepas apresentou o gene mecA, contudo 40% das cepas apresentaram o gene blaZ. Vinte e três perfis diferentes foram estabelecidos por associação de dados de virulência e resistência. Essa grande diversidade de cepas mostra a ampla gama de estratégias bacterianas e o desafio da prevenção à mastite no gado bovino, considerando-se que, a despeito da suscetibilidade antimicrobiana, essas cepas apresentam genes que permitem sua persistência no rebanho.

ABSTRACT This study aims to detect the main virulence and antimicrobial resistance genes in Stapylococcus aureus from bovine mastitic milk as well as classifying them according to agr typing. A total of 55 strains from six dairy unities in the state of Rio de Janeiro were selected, of these 27.3% presented fbnA and 78,2% for fbnB genes, respectively. None of the strains tested were positive for cap5 gene, 3.6% were positive for cap8 gene. Additionally, 94.5% of strains had hlA gene and 89.1% had hlB gene while 67.3% of the strains had icaA gene and 87.3% had icaD gene. From these results it was possible to establish 12 different virulence profiles. Prevalence of agrII type was detected in 81.8% of the isolates. Concerning antimicrobial resistance evaluation, the studied strains were susceptible to all antibiotics tested except penicillin, 83.6% being resistant strains. None of the strains had mecA gene, however, 40% of the strains had blaZ gene. Associating virulence and resistance data made it possible to obtain 23 different profiles. This great diversity of strains shows wide array of bacterial strategies and the challenge of mastitis prevention in cattle. Despite antimicrobial susceptibility, these strains presented certain genes that allow its persistence in the herd.

Os objetivos do estudo foram identificar a presença de microrganismos nos condutos auditivos dos cães através dos exames citológico e microbiológico, assim como avaliar a associação destes à otoacaríase e seus sinais clínicos. O diagnóstico da infestação por Otodectes cynotis foi realizado através de otoscopia bilateral e pela coleta de material e visualização do parasito sob microscópio esterioscópico, constituindo o exame parasitológico. Outras coletas de secreção otológica de cada orelha foram realizadas para confecção de lâminas para a citologia e para o isolamento microbiológico, sendo este último material coletado através de "swab" estéril. Dos 250 animais examinados, em 15 (6%) foi identificado o ácaro O. cynotis.Observou-se associação entre a presença do parasito e a ocorrência de otite clínica externa caracterizada especialmente por eritema auricular (P<0,001) e a produção excessiva de secreção otológica (P=0,0016), assim como a observação, pelos proprietários, de prurido ótico nos cães (P<0,001). Sugere-se a possibilidade de essas associações serem efeito da infestação. Houve também a associação (P<0,01) entre a otoacaríase e a ocorrência de microrganismos nos dois condutos auditivos de cada animal, detectados através da citologia. No entanto, não houve associação (P=0,04 e p=0,07) entre a presença do ácaro O. cynotis e a ocorrência de microrganismos no exame microbiológico das orelhas direita e esquerda, respectivamente.

ABSTRACT The goals of this study were to identify microorganisms in dogs' ear canals through cytological and microbiological examination, and evaluate their association with otoacariasis and its clinical signs. Otodectes cynotis infestation diagnosis was achieved by bilateral otoscopy, and by parasite viewing on cerumem under stereoscopic microscope, representing the parasitological exam. Ear discharge was also collected from each canal to fix cytology slides and for microbiological isolation, but this last sample was collected with sterile swab. Among the 250 studied animals, 15 (6%) had ear mites. There was an association between the parasite and external clinical otitis specially as established by auricular erythema (P<0,001) and excessive production of ear discharge (P=0,0016), as well as ear pruritus observed by the owners (P<0,001). It has been suggested that these associations can be an effect of the infestations. There was also an association (P<0,01) between otoacariasis and microorganisms detected by cytological exam in both ear canals of each dog. However, there was no association (P=0,04 e P=0,07) between the presence of ear mite and microorganisms detected by microbiological exam of right and left ears.

Os efeitos da parede celular de Saccharomyces cerevisiae (PCSc) na dieta para frangos foram avaliados com base nos tratamentos: dieta referência com avilamicina (AV); dieta referência (DR); DR com 0,1% de PCSc (PCSc0,1); DR com 0,2% de PCSc (PCSc0,2); DR com 0,3% de PCSc (PCSc0,3). O delineamento foi o de blocos ao acaso, com cinco tratamentos e seis repetições de 10 aves, totalizando 300 frangos, machos. No período de nove a 21 dias de idade, o tratamento PCSc0,3 influenciou negativamente no ganho de peso (631g), e no período de 34 a 39 dias, o tratamento PCSc0,1 proporcionou melhor ganho de peso (461g) em relação ao tratamento com o antimicrobiano. O maior peso vivo ao abate, 2571g, foi obtido no tratamento PCSc0,1. Os pesos absolutos de sobrecoxa e coxa+sobrecoxa foram maiores nos tratamentos PCSc0,1 (290g e 560g) e PCSc0,2 (292g e 561g) e menores no tratamento PCSc0,3 (263g e 515g). Não houve influência na metabolizabilidade da ração e na contagem total de coliformes totais no íleo. Dietas com inclusão de até 0,2% de PCSc resultaram em índices produtivos adequados, podendo ser utilizadas como aditivo em dietas livres de antimicrobiano melhorador de desempenho sem o comprometimento do desempenho, características de carcaça, metabolizabilidade da ração e da contagem total de coliformes totais do íleo.

The effects of the yeast cell wall (Saccharomyces cerevisiae) (CWSc) in the diet of broiler chickens were evaluated through the following treatments: reference diet with avilamicin (AV); reference diet (RD); RD with 0.1% CWSc (CWSc0,1); RD with 0.2% CWSc (CWSc0,2); RD with 0.3% CWSc (CWSc0,3). The study design was randomized blocks, with five treatments and six replicates of 10 birds, totaling 300 male broilers. In the period from 9 to 21 days treatment CWSc0.3 had a negative influence on weight gain (631g) and from 34 to 39 days CWSc0.1 provided better weight gain (461g) compared to the treatment with the antimicrobial. The highest live weight value at slaughter, 2,571 grams, was obtained in treatment CWSc0.1. The absolute weights of drumstick and thigh+drumstick were higher in treatments CWSc0.1 (290g and 560g) and CWSc0.2 (292g and 561g) and were lower for CWSc0.3 (263g and 515g). There was no influence of the treatments on both the metabolizability and the total count of coliforms in the ileum. Diets until 0.2% of PCSc inclusion resulted in correct productive rates and they can be used as a ration growth promoter additive in antimicrobial free diets without damage on performance, carcass characteristics, organ weight, metabolizability of the diets and total coliform count in the ileum.

Staphylococcus aureus is the major pathogen causing intramammary infections in dairy cattle worldwide. Among the factors that contribute to its spread and infectious potential is the ability to overcome the mechanisms of antimicrobials activity. The present work investigated the antimicrobial resistance pattern and sensibility to bacteriocins produced by strains of Lactobacillus spp of 30 isolates of S. aureus from mastitis. From this, 29 are beta-lactamase producers. Eight isolates (26.6%) showed resistance to at least four antibiotics being considered multiresistent. All of them were mecA-positive. Otherwise, all isolates tested showed sensibility to at least one of the four bacteriocin producer strains. Due to the significant depletion of the efficacy of antimicrobials, pathogen growth inhibition by bacteriocins seems an alternative of biological control in infectious processes.

Avaliou-se o perfil de suscetibilidade bacteriana de diferentes sítios infecciosos frente aos antimicrobianos de eleição e determinaram-se o perfil de atividade in vitro e a concentração inibitória mínima (CIM) da azitromicina. Diferentes testes fenotípicos detectaram resistência à azitromicina em 45% de Staphylococcus spp. e 65% dos bastonetes Gram-negativo. A CIM50 para S. aureus foi 4,0μg/mL para S. intermedius 1,0μg/mL, Staphylococcus spp. coagulase-negativo >512μg/mL e bastonetes Gram-negativo 256μg/mL. Investigou-se, também, uma possível resistência cruzada entre oxacilina e azitromicina por meio da detecção do gene mecA em Staphylococcus spp. Foi possível detectar resistência à azitromicina em nove (15%) isolados de Staphylococcus spp. mecA positivo.

Antimicrobials susceptibility pattern of bacterial isolated from different sites of infection, in vitro azithromycin activity pattern, and its minimum inhibitory concentration (MIC) values were evaluated. Different phenotypic tests detected azithromycin resistance in 45% of Staphylococcus spp. and 65% of resistant Gram-negative rods. MIC50 was 4.0μg/mL for Staphylococcus aureus, 1.0μg/mL for S. intermedius, >512.0μg/mL for coagulase negative Staphylococcus, and 256.0μg/mL for Gram-negative rods. In addition, it was investigated the possible cross-resistance between oxacillin and azithromycin, by detection of mecA gen in Staphylococcus spp. Nine (15%) mecA-positive Staphylococcus spp. were also phenotypically resistant to azithromycin.

This study report the first description of bacterial species recovered from body segments of Stomoxys calcitrans collected in dairy farms from Rio de Janeiro State, Brazil. Eighteen out of 33 isolated and identified species were unknown in stable flies by the worldwide literature. Some of these species have the potential to develop diseases in man and other animals and some others have not been described yet as pathogenic agents.